细胞计数仪 (countess细胞计数仪)

细胞计数仪 (countess细胞计数仪)

原创 赛默飞生命科学 赛默飞生命科学 2018-01-15

细胞计数有多重要？

这个答案想必不用回答，大家都心里有数。

毕竟我们都曾经历过，花了一整天的时间制备细胞、染色、分选，进行一个精密计划的实验，结果却因为发现细胞量却不够而被迫结束。

如今圈子里最常用的细胞计数方法是显微镜+血球计数板，然而隔壁实验室的小明都在用自动的细胞计数仪了。

但一些只相信所见即所得的小伙伴，对于自动细胞计数仍旧不太信任，因此今天体贴如我就为大家比对一下自动细胞计数仪和血球计数板。

让我们开始吧！

对比1: 准确度

主观差异性

不论采用哪种细胞计数方法，依靠操作人员的判断都会导致结果出错。

Countess II 仪器采用了先进的算法来 确定最佳焦距和光强度；可去除诸多主观变量，同时还可节省时间。利用定量方法，根据细 胞大小、亮度和圆度对细胞进行设门，而不是依靠 操作人员的判断，这有助于减少主观性错误，提高 样本和用户间的重复性 (图 1)。

图 1. 采用血球计数板与 Countess II 仪器进行计数的用户差异比较。由三位不同的操作人员，采用 Countess II 细胞 计数仪以及血球计数板和显微镜，对相同的 A549、COS-7、HeLa 和 U2OS 细胞样本进行计数。血球计数板的用户间差 异明显高于 Countess II 仪器。 

取样数量

实际上，许多研究人员无法计数足够的细胞，这会导致细胞计数结果不可靠，且标准差高。为了在手 动计数过程中节省时间，许多用户只对传统的血球 计数板网格中的一个或两个方格进行计数。

计数更多方格 (即更大的面积) 一般会提高结果的一致 性，但需要耗费更多时间。

Countess II 自动细胞计数仪仅需 10秒即可分析相当于近 4 个传统血球 计数板的方格，降低了细胞分布差异效应，提高了 计数结果的一致性 (图 2)。

面积:2.15 mm x 1.62 mm (3.48 mm2)

图 2. 计数面积。Countess II 仪器与标准血球计数板的计数面积比较。

细胞团块计数

采用手动细胞计数方法及一些自动细胞计数仪计 数含有细胞团块的样本，很难获得准确的计数结 果。计数细胞团块面临的常见挑战是区分细胞间的 边界，确定团块中的细胞数量。一些自动细胞计数 仪无法准确计数只含五个甚至更少细胞的团块。 Countess II 仪器采用了先进的计数算法，可以明 确地鉴别复杂细胞团块中的细胞边界，从而获得准 确的细胞计数结果 (图 3)。

图 3. 即便是计数细胞团块样本，亦可获得准确的细胞计数。Countess II 细胞计数仪的分割和计数算法能够分辨 NIH/3T3 细胞样本中的细胞团块。

荧光细胞计数

流式细胞仪及采用血球计数板和显微镜进行手动 细胞计数是荧光蛋白表达分析的金标准，但这两种 方法都需要高级用户培训和相对昂贵的仪器。 Countess II FL 自动细胞计数仪能够提供相当准确 的荧光细胞计数，包含两个可选的用 户可更换的荧光通道。采集的颜色取决于光立方; 有超过 20 种光立方可供选择。

图 4. 采用流式细胞术获得的荧光细胞计数值可采用配备 单个光立方的 Countess II FL 自动细胞计数仪轻松获取。 使用 InvitrogenTMCellLightTM 细胞核-GFP, BacMam 2.0 (货号:C10602) 转导 U2OS 细胞，孵育 36 小时。利用(A) 流式细胞术和 (B) Countess II FL 自动细胞计数仪评估细 胞中的GFP。采用上述两种方法测得的转导细胞比例几乎 一样。 

对比2：成本

研究人员不愿意采用自动细胞计数的主要原因在 于，自动化系统需要采用专用的一次性载玻片，这 会带来长期成本。

Countess II FL 自 动细胞计数仪可支持可重复使用的玻璃载玻片 (图 5)，大大降低了成本，但也可以使用方便的一 次性载玻片。这一经济实惠的创新设计使得实验室 能够采用这种出众的细胞计数方法，且无需负担其 他自动细胞计数仪的耗材成本。

图 5. Countess II FL 自动细胞计数仪的可重复使用的载玻片有助于降低耗材成本。 

对比3：节省时间

采用 Countess II 自动细胞计数仪进行细胞计数 (10 秒) 相比手动细胞计数 (至少 5 分钟) 节省的 时间成本常被忽视。如果每天计数 5 块载玻片 (每 片 2 个样本)，转换至使用可重复使用的载玻片的 自动细胞计数仪，每个月可节省约 10 个小时。当 使用一次性载玻片时，每个月节省的时间可达约 15 小时 (图 6)。这些时间可用于完成实验室的其 他工作，因此从手动细胞计数切换至自动细胞计数 的优势明显。

图 6. 从手动细胞计数切换至自动细胞计数仪，每个月可以节省的时间估计。 

对比4：结果

采用血球计数板获得的信息仅限于样本中的总细 胞数、活细胞数和死细胞数。自动细胞计数仪还可 以获得的数据包括平均细胞大小以及基于荧光强度或活细胞和死细胞大小的细胞分布直方图 (图 7)。采用 Countess II 仪器，可将采集的信息保存 为 CSV 文件，保存至 USB 驱动器上供进一步分析。 原始图像及结果界面均可保存至 USB 驱动器并传 输至计算机上。

图 7. 结果显示了平均细胞大小和细胞大小分布，有助于靶向特定的细胞群体。 二 细胞计数仪

原创 亨睿生物 深圳亨睿生物科技有限公司 5月23日

「细胞计数仪」

01 干细胞研究背景

干细胞新疗法的不断出现，不仅给更多的疾病带来治疗新思路，也给市场的发展注入源源不断的驱动力。

2018年，欧盟批准了脂肪来源间充质干细胞治疗产品Alofisel上市，适应症为克罗恩病患者复杂性肛周瘘。

同年，我国申报受理了5款间充质干细胞治疗产品。此外，基于诱导多能干细胞的新型疗法也有多项获批进入临床试验。

例如，去年日本批准了世界首个iPS细胞治疗帕金森的临床试验，又批准了世界首个基于iPS细胞的心脏治疗试验。2019年2月，日本批准了全球首例iPS细胞治Q疗脊髓损伤的临床试验。

在干细胞研究和转化应用快速发展的同时，也出现了一些问题，干细胞制备标准不统一，质量存在严重隐患，一些逃避政府监管、缺乏临床前研究数据的干细胞治疗屡禁不止。

因此，国家卫生健康委员会制定了《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》，并发布中国第一个干细胞行业法规《干细胞临床研究管理办法（）》来规范干细胞临床研究，充分保护受试者的权益。

因此，干细胞的临床研究不再是一个空白地带无人监管，而是有明确的法律文件进行指导和约束。

02 干细胞制剂与试用环节的难点

1. 原代间充质干细胞分离后含有大量的杂质，从胎盘和脐带血中提取的原代细胞数量和质量难以控制；

2. 传统方法冻存前干细胞活率判断粗略，并不明确细胞具体所处的生长周期和凋亡状态；

3. 干细胞冻存前后和运输前后的活率，用台盼蓝染色法难以准确判断；

4. 干细胞制剂或冻存干细胞的CD maker检测用流式检测工序繁琐、成本高昂；

5. 缺乏一套简洁易行的放行检测方法和标准，以及实现质量鉴定控制的小型仪器；

6. 目前以单个细胞为对象的质量监控方法主要有显微镜、流式细胞仪等，但是显微镜容易引入人为因素，造成检测结果不可控，另外，流式细胞仪的操作维护相对复杂，缺乏完成整个质控体系细胞质量检测的设备；

03 在干细胞质量鉴定控制的应用

从研发、生产、质控、存储、临床等环节都可以应用，在制剂优化、培养基优化、CMC工艺验证、入库检、过程检、放行检、复核检等相关环节都能够充分发挥作用。

对细胞计数和活率的检测基本所有质检环节都会使用，而且是入库检、过程检、放行检和复核检的必检项目。

在干细胞研究领域中，从干细胞复苏至最终用于研究，中间过程需要经历细胞传代及运输。因此细胞在整个过程中的质量变化对最终的研究结果有着至关重要的影响。

细胞质量包括了浓度、活率以及细胞表型。Countstar Rigel AO/PI双荧光活率计数方法

可对刚复苏以及运输后的干细胞进行快速准确的活率、浓度测量。

同时高灵敏度的光学系统，可精确，便捷的完成干细胞表型分析，以及生长周期和凋亡状态的分析。

1.表型分析：入库检和放行检的必检项目

2.细胞凋亡：一般在过程检和复核检进行，非必检项目。

3. 细胞周期：一般在过程检，作为内部质控，一般放行检不做，非必检项目。

4. 新鲜样本：对运输冷链要求高，稳定性要求高，有的要求5h内回输，可存储时间24h之内，最长48h。

5.冻存样本：采用液氮运输，不限制运输方式，转移7天完全可行。空运-铁路-汽车都可使用，后续也可以放在液氮中继续保存，可以保证7天低温。

6. 间充质干细胞在入库检和放行检都要检测表型，CD3、CD4、CD8也会检测，主要评估干细胞对免疫细胞的影响。

04 对干细胞的分析结果

1. 对间充质干细胞的细胞活率分析

（1）提供两种（台盼蓝和AO/PI法）检测细胞的活率。

以下三张图是运输前

Trypan blue

AO/PI-BF

AO/PI-FL

以下三张图是运输后

Trypan blue

AO/PI-BF

AO/PI-FL

图1. 运输后：细胞折光指数改变，台盼蓝染色不明显，难以确定细胞活率。AO/PI双色荧光可以对有核细胞进行染色，即使在有碎片、血小板和红细胞存在下也能精确地进行细胞活率测试。

（2）AO/PI荧光染色法对细胞死活进行鉴定更为灵敏

图2. 台盼蓝测试活率对于状态好的细胞测试结果比较准确，对于状态不好的细胞（运输后），测试结果与AO/PI法相差较大。AO/PI的方法能更为灵敏的反映细胞状态的差异。

2.对间充质干细胞的细胞凋亡分析

Control

Treatment

Necrosis cell

图3. Control为未经任何处理的间充质干细胞；treatment为经58℃水浴3min的同浓度间充质干细胞。经过热水浴物理凋亡的间充质干细胞活率降低，凋亡细胞数量增多。

3.对间充质干细胞的细胞周期分析

图4. 间充质干细胞细胞周期检测结果。

05 在干细胞检测中的优势

1. AO/PI荧光染色法可对细胞死活进行明确检测

2. 20μl完成检测，细胞和试剂耗费少，成本低

3. CD maker检测简捷快速，无需流式专人维护、无需清洗养护

4. 可输出流式聚类分析结果，与流式检测法可验证可对比

5. 精细到单个细胞的图像和参数输出，让计数结果清晰可见

6. 小巧便捷，让放行质检和回输前质检采用同一标准成为可能

7. 按照GMP、cGMP和FDA数据存储、用户管理、电子签名要求的规范设计，保证信息来源可靠、可追溯，可提供GMP认证相关3Q验证服务

8. 可通过局域网连接服务器，实施上传检测结果，数据更安全

9. 应用点综合性：可用于干细胞的计数、活率、周期、凋亡、表型分析。

06 细胞计数仪应用举例

1. Countstar Rigel可应用于干细胞制剂存储前后的细胞浓度和活率的检测

2. 可用于脐带血运输前后细胞质量检测，使用AO/PI法计数，可以更精确地进行细胞浓度和活率的检测

3. 干细胞冻存检测保种质量控制：检测从胎盘和脐带中提取的原代细胞的浓度和活率；冻存前干细胞CD marker检测；冻存前干细胞生长周期和凋亡状态判断

4. 干细胞制剂的放行质控体系：Countstar Rigel的软件和文件系统符合GMP要求；最大限度避免在QC阶段引入人的主观因素；质控体系使用的必须是小型化的一体多功能检测机器，Countstar Rigel适用于整个链条

质控体系前、中、后期必须采用同样的设备和标准，需要保证各机器间的一致性和可验证，Countstar Rigel可通过局域网连接服务器，实现多台仪器检测数据的实时上传。

免责声明：内容来源于厂家，版权归作者所有，侵权联系删除。

三【产品推介】Countstar细胞计数仪-----细胞计数从此不再繁重

五洲东方 2017-09-12

“为了保证后续实验的细胞品质，许多实验室会对细胞的浓度和活率进行检测，传统的方法是通过针对哺乳动物细胞的台盼蓝染料，针对酵母的美兰染料。两种染料都是染色细胞核的，当细胞存活时，膜具有选择透过性，染料无法进入细胞内。当细胞死亡后，膜的选择透过性失去，染料便可以进入细胞核将细胞染色。从而区分出细胞的死活。传统的血球计数板操作复杂，误差大已经越来越多的被自动化的细胞计数仪所取代。Countstar

系列细胞计数仪，具有多方面的特性，这项特性保证了计数结果的准确性和稳定性。 ”

极其便捷的操作

Countstar®细胞计数仪操作机器方便，只需要简单的三步就可以完成细胞浓度活率测定。

您只需要上样20微升，将计数板插入仪器，点击开始20秒以内就可以得到细胞的浓度和活率

不需要人工调焦

基于图像分析的计数仪都需要在正确的焦距下得到清晰的细胞图像，进而进行图像分析得到计数结果。如果焦距调整的不正确，将会严重的影响浓度及死活判断。下图就是一些列焦距错误的图片，如果焦距调整不当，会严重的影响死活的判断，影响计数结果的稳定性。Countstar

全系列细胞计数仪在使用过程中都无需进行人工调焦，极大程度的避免了焦距误差对于死活判定的影响。

焦距偏差或严重的影响死活判断

良好的景深性能

当镜头对着某一物体聚焦清晰时，在镜头中心所对的位置垂直镜头轴线的同一平面的点都可以在胶片或者接收器上相当清晰的图像，在这个平面沿着镜头轴线的前面和后面一定范围的点也可以结成眼睛可以接受的较清晰的像点，把这个平面的前面和后面的所有景物的距离叫做相机的景深。

对于细胞计数仪景深的意义在于可以可以在CCD上清晰成像的细胞悬液的深度。一般的计数板都有100-200微米的深度，如果镜头的景深性能不佳时，会使一些在景深范围以内的细胞无法成像。理想的计数仪应当是可以将整个计数板深度的内的细胞都清晰成像。景深受镜头焦距，物距，光圈大小CCD大小的影响。Countstar细胞计数仪权衡各个因素，设计出大景深的成像系统，保证计数板内的细胞都可以清晰呈像，保证计数结果的稳定性与准确性。

多视野检测

将一定体积的细胞悬液加入恒定的空间内时，伴随恒定空间内液体流速的差异，表现为细胞的分布密度会有轻微的差异，这个现象是无法完全避免的。在细胞计数之初，人们就考虑到了这个问题，标准的血球计数板操作需要统计4个角的细胞浓度然后求平均值。Countstar®全系列细胞计数仪，在大视野大统计量的基础上又引入了多视野检测，可以对于一个样品检测多个视野，软件自动求平均。在下图中上方live 3平均值，一共统计了3个不同的视野，然后自动计算平均值，可以看到下方三个视野的值高度接近，进一步求平均可以完全抵消细胞分布不均引起的误差。

极大的细胞抽样量

Countstar独特的镜头可以保证每一个计数的视野所采集到的细胞量远远的大于人工技术的结果。在104浓度时，血球计数板每一个视野只能采集到10个以内的细胞，而在106-107次方浓度时，视野中的细胞数目由太多也无法统计。使用血球计数板计数时需要将细胞浓度调节到105次方才能进行统计。在浓度调节过程中反复的稀释或浓缩操作会引入新的误差，在105次方计数时，只计数两位数的细胞，一个细胞判定不同就会带来1—2%的误差。Coutstar细胞计数仪极高的视野内采样量，在配合多视野检测，使得计数结果更加的准确稳定。

完善的杂质过滤功能

Countstar®细胞计数仪可以有效区分细胞碎片及背景杂质，排除细胞碎片，背景杂质对于计数结果的影响。如下图所示，细胞计数结果中细胞碎片和背景杂质被自动去除。

先进的结团校正功能

在进行原代培养，或者细胞消化不完全是常常会产生细胞团块。使用血球计数板计数时，标准的操作要求将一个团块技术为一个细胞，但是这并不能表示细胞悬液的真实浓度。Countstar

细胞计数仪的分析软件，具有先进的算法，可以将团块中的细胞分辨出来，更加真实的反应您细胞的浓度与活率。

四 我是你的眼——多功能细胞计数仪 Luna FL

原创 基因市场部 基因快讯 5月8日

解放双眼，手握Luna FL

在生物学和医学方面，我们常常需要对细胞进行计数，当我们使用传统的血球计数板的方法时，虽然检测成本较低，但是缺点也极为突出，由于依赖于每个人的主观判断，因此重复性较差，而且需要长时间的计数，容易引起眼部疲劳，也会影响计数的准确性。因此在这里我们向您推荐Luna FL多功能自动细胞计数仪——解放您的双眼!

Luna FL细胞计数仪介绍：

这是一款来自韩国的多功能自动细胞计数仪，完美的改善了血球计数板进行计数的缺点，基于大视野成像，并确保在同一参数下对细胞进行自动计数，大大提高了细胞计数的重复性与准确性。它不仅支持台盼兰染色/非染色的明场计数，还支持荧光场如AO/PI染料的细胞计数和活性检测。如此便极大的扩大了应用范围，可用于细胞系、原代细胞、干细胞、酵母等细胞的计数。同时还可进行GF转染效率的评估。由此可见Luna FL是一款多功能、准确性高的小巧型细胞计数仪。

Luna FL实现多功能的原理

我们采用了明场和荧光场通道二合一技术，因此我们可以兼容明场和荧光场计数。基于图像成像方法对视野范围内细胞进行准确计数，并依据稀释倍数计算出原液浓度，极大缩短了您原始计数方法的时间。

由于我们这台仪器增设了荧光场通道，因此我们除了完成明场细胞计数以外，还可以实现荧光场下对较复杂细胞样品的细胞计数和细胞活性检测，如尺寸较小的淋巴细胞、酵母细胞、成分较复杂的原代细胞、PBMC等，还内置了APP用于GFP转染效率的评估。用我们这台小小的仪器就可以完成基于绝大部分细胞类型的细胞计数和活性检测。

操作简单：

01 样品制备、加样

将18µL细胞样品和2µLAO/PI荧光染料混合进行染色。用移液枪吸取10-12µL样品加到芯中。

02 插入芯片

03 进行细胞计数

选择预设好的Protocol , 直接点击Count即可，同时可获得明场、Green、Red通道的结果。

查看、保存结果

计数完成后，点击‘Save/Print’进行保存和打印，根据您的需要，点击‘Graph’进行细胞尺寸设门进行分析，点击‘Images’可查看不同通道的图片。可保存5百万像素的图片以及PDF文件。

五 全球第一款无耗材全自动细胞计数仪——CellDrop

格卢瑞仪器 2019-12-03

Denovix 在生命科学仪器创新领域已经是众所周知的大品牌了，从发明超微量技术成立Nanodrop出售给热电后，到2013 年，Denovix 又推出全球首台智能化超微量分光光度计，如今2019 年，Denovix 推出全球首款颠覆性的无耗材细胞计数仪，无需细胞计数板，自行可变检测高度，毫无顾虑的开展细胞计数。Denovix 的每一步都堪称辉煌。

作为全球首款颠覆性的无耗材全自动细胞计数仪，CellDrop采用最新一代DirectPipette技术，DirectPipette 技术灵感来自于著名的超微量光度计 SmartPath 专利技术*，将细胞溶液用移液器加到样品台即可检测，检测完成用纸巾擦拭掉样品即可。结合先进的荧光和明场成像技术，开创实验室低成本高精度快速细胞分析的新时代。

注：SmartPath 专利技术是美国专利局于 2016 年授予Denovix 公司最新的智能感应动态可变光程浓度检测技术，也是目前领先的超微量浓度检测技术，具有检测动力学宽，高精度，高灵敏度，终生精度，无需校准等优点。

产品性能优势

实时成像图

1、三通道图像叠加

2、细胞 gating 和细胞尺寸分布柱状图

3、先进的分布算法及高清边缘定义检测

4、强大的数据报告及图像处理

5、密码保护使用人账号

PBMC图

精确区分活细胞/死细胞和无核细胞，先进的分布算法大幅提高计数精度和重复性，尤其对于那些具有挑战性的细胞样品，细胞边缘，即使在高浓度下也可轻松完成。

便捷的操作系统

每一个独立APP对应一个功能

基于 lumex 系统，独立 app,自动 wifi 连接，邮件发送数据，存储的图像可用于再分析，后期扩展应用。

2018年12月美国细胞年会（ASCB）上，美国Denovix推出首款颠覆性无耗材荧光型细胞计数仪，并命名Celldrop FL。从此改变荧光细胞计数仪需要昂贵耗材的历史，极大的降低了实验成本，将为传统细胞计数市场带来巨大改变。

Celldrop采用先进的DirectPipette技术（由著名超微量光度计SmartPath专利技术衍生而来），可以根据样品浓度，细胞直径而选择最适合的检测高度，避免了传统方法需要选择不同厚度的细胞计数芯片或不同直径的微流芯片。

Celldrop FL可提供双通道荧光检测模式，明场检测模式，台酚蓝检测，以及酵母检测模式，一机多能，功能强大。仪器操作也保持了超微量光度计的特点，非常简单，检测时间仅需8秒。只需用移液器加样到样品台，点击检测app，检测完成拿纸巾擦拭掉样品即可。

Celldrop FL可自动连接wifi，可自动存储结果，保存的图像可在将来随时调出进行分析。实验结果可通过邮箱发送，也可通过USB传输。Celldrop FL分析软件功能强大，覆盖了众多荧光应用，后续将通过软件升级增加新的应用功能。

Celldrop FL（荧光型）和Celldrop BF（明场型）将于明年1月正式上市。欢迎各地/各相关行业感兴趣的代理商朋友咨询合作。

注：SmartPath专利技术是美国专利局于2016年授予Denovix公司最新的智能感应动态可变光程浓度检测技术，也是目前领先的超微量浓度检测技术，具有检测动力学宽，高精度，高灵敏度，终生精度，无需校准等优点。

以上就是（细胞计数仪 (countess细胞计数仪)）全部内容，收藏起来下次访问不迷路！